产品货号：
BTN990103
中文名称：
2×Tth RT-qPCR预混液(染料法)
英文名称：
2X SYBR Tth qRT-PCR Mix
产品规格：
1mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品是基于Tth DNA聚合酶的荧光染料法RT-qPCR，它含有经过优化的缓冲液组分、Tth DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、SYBR Green I等所有实时定量RT-PCR所需要的成分。
与常用的MMLV-Taq DNA酶RT-PCR体系相比，它们的区别如下：
- 方便，用户只需准备模板、引物即可以进行实时定量RT-PCR实验。
- 产品为2×预混液，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
- 60～70℃进行RT-PCR，避免了RNA二级结构打不开问题和非特异扩增问题。
- 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
- 1mL本制品足够100次20μL体系的染料法荧光定量RT-PCR。
| 组分 | 规格 |
| 2×Tth qRT-PCR预混液(染料法) | 1mL |
| 说明书 | 1份 |
保存：-20℃，有效期1年。
RNA模板、引物、超纯水。
- 按下表设置染料法Tth RT-PCR反应，以一个样本为例：
成分 样品管 阴性对照 阳性对照 2×Tth qRT-PCR预混液(染料法) 10μL 10μL 10μL 自备引物1(10μM) 1μL 1μL 1μL 自备引物2(10μM) 1μL 1μL 1μL 自备模板RNA(100ng～1μg) 1～2μL 阳性对照RNA模板(100ng～1μg) 1～2μL 超纯水到 20μL 20μL 20μL - 放入荧光PCR仪中进行扩增，下表的扩增参数仅供参考，一般需要根据靶分子长度，引物的Tm值等进行调节。
- 一般选择三步法PCR：
步骤 温度 时间 逆转录 60～70℃ 30min(具体温度根据引物Tm决定) 预变性 95℃ 3min PCR反应
(35～45循环)95℃ 15sec 55～65℃ 15～30sec 72℃ 30sec(采集SYBR通道的荧光信号) 溶解曲线分析 按PCR厂家建议进行 - 如果引物Tm值接近60℃，也可以选择两步法PCR：
步骤 温度 时间 逆转录 60～70℃ 30min(具体温度根据引物Tm决定) 预变性 95℃ 3min PCR反应
(35～45循环)95℃ 15sec 60℃ 60sec(采集SYBR通道的荧光信号) 溶解曲线分析 按PCR厂家建议进行
- 一般选择三步法PCR：
- 定量分析数据处理：根据溶解曲线分析剔除假阳性样本。如果样本经过溶解曲线分析，其数据有效，则进行定量分析。以6个10倍稀释的标准曲线样本的浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 定性分析数据处理：根据溶解曲线分析剔除假阳性样本。如果样本经过溶解曲线分析，其数据有效，则进行定型分析。阴性对照Ct大于或等于40（此处为便于叙述姑且以40为例，具体设置成多少需要用户根据引物探针的具体情况测试确定）。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于40则为阳性。
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